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      1. 產(chǎn)品中心您的位置:網(wǎng)站首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 試劑 > > SJ1271TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)

        TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)

        更新日期:2023-12-14

        訪(fǎng)問(wèn)量:2113

        廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家

        所在城市:上海市

        簡(jiǎn)要描述:
        細胞凋亡時(shí),部分DNA內切酶會(huì )被激活,進(jìn)而切斷基因組DNA。TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細胞凋亡檢測試劑盒可以用來(lái)檢測組織細胞在凋亡晚期過(guò)程中細胞核DNA的斷裂情況。
        品牌其他品牌供貨周期現貨
        應用領(lǐng)域醫療衛生,生物產(chǎn)業(yè)

        其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時(shí)暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入生物素(Biotin)標志的dUTP,隨后通過(guò)Biotin與連接辣根過(guò)氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結合,在辣根過(guò)氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的存在下,產(chǎn)生深棕色的不溶物,從而特異準確地定位凋亡的細胞。

        本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測,檢測結果可在普通光學(xué)顯微鏡下直接觀(guān)察計數。
        包裝清單:

        產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱(chēng)包裝1包裝2
        SJ1271
        TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法)20T50T
        說(shuō)明書(shū)一份



        產(chǎn)品組成:

        編號

        組分

        20T

        50T

        儲存條件

        試劑(A)

        50× Proteinase K

        20 ul

        100 ul

        -20℃

        試劑(B)

        10 × DNase I Buffer

        100 ul

        500 ul

        -20℃

        試劑(C)

        DNase I

        20 ul

        100 ul

        -20℃

        試劑(D)

        Equilibration Buffer

        2 ml

        10 ml

        -20℃

        試劑(E)

        5×TdT Enzyme Buffer

        200 ul

        1 ml

        -20℃

        試劑(F)

        Recombinant TdT Enzyme

        20 ul

        100 ul

        -20℃

        試劑(G)

        Biotin-11-dUTP

        20 ul

        100 ul

        -20℃

        試劑(H)

        dATP

        20 ul

        100 ul

        -20℃

        試劑(I

        Streptavidin-HRP

        20 ul

        100 ul

        4℃

        試劑(J

        DAB-A solution

        1 ml

        5 ml

        -20℃

        試劑(K

        DAB-B solution

        50 ul

        250 ul

        -20℃


        保存條件:

        Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試劑-20 ℃保存,一年有效。

        操作步驟:

        1、樣本處理:

        a) 石蠟切片:經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟,復水。脫蠟應充分。

        b) 冰凍切片:流水沖洗,去除OCT包埋膠后,用純水洗3次。

        c) 細胞飛片:用組織固定液固定后,用PBS洗三次,每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三次,每次5分鐘。

        2、蛋白酶消化

        將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分鐘。消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

        3、封閉

        用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉10分鐘,封閉結束后用PBS洗三次,每次5分鐘。

        4、陽(yáng)性對照組織的處理

        將組織用DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽(yáng)性的對照。陽(yáng)性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。

        純水

        46 ul

        試劑(B): 10 × DNase I Buffer

        5 ul

        試劑(C): DNase I

        1 ul

        共計

        50 ul

        50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

        5、連接:

        連接反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過(guò)程中按下表配制連接工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后,直接滴加50ul 連接工作液,37℃孵育1-2小時(shí),染色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。

        試劑(D)Equilibration   Buffer

        37 ul

        試劑(E)5×TdT Enzyme   Buffer

        10 ul

        試劑(F)Recombinant   TdT Enzyme

        1 ul

        試劑(G)Biotin-11-dUTP

        1 ul

        試劑(H)dATP

        1 ul

        共計

        50 ul

        6、標志

        取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混勻后滴加至組織上,37℃避光孵育30分鐘,隨后用PBS洗三次,每次5分鐘。

        7、顯色

        取50 ul 試劑(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試劑(K)DAB-B solution混勻后,滴加至組織上,室溫顯色反應30秒至5分鐘。顯色結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘

        8、蘇木素復染

        每組織上滴加數滴Mayer’s蘇木素染色液,染色1-5分鐘,隨后用自來(lái)水沖洗反藍,如蘇木素染色過(guò)深,可用1%鹽酸酒精溶液分化數秒,再次反藍;如蘇木素染色過(guò)淺,可用蘇木素再次染色,并延長(cháng)染色時(shí)間。

        9、封片觀(guān)察

        經(jīng)梯度酒精脫水,二甲苯透明后,滴加中性樹(shù)膠,加蓋玻片封片,光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察拍照。

        注意事項:

        1、Proteinase K 消化時(shí)間需要摸索,冰凍切片 10 min 左右,石蠟切片時(shí)間應適當延長(cháng)。

        2、陰性對照體系:配制連接工作液時(shí)用純水替代TdT Enzyme。

        3、連接與標志反應時(shí)應注意避光。

        4、實(shí)驗過(guò)程中請穿戴手套、實(shí)驗服等,做好個(gè)人防護。

        備注

                 產(chǎn)品信息可能會(huì )有優(yōu)化升級,請以實(shí)際標簽信息為準。

        本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

        為了您的安全和健康,請在實(shí)驗過(guò)程中做好防護工作。



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